Определение группы крови и резус-фактора

Авторы:Нурболаткызы Марияхан, Медсестра приемного отделения,

              Байдолдинова Маржан Багдаткызы, Медсестра операционного блока,

              Какимжанова Алия Серикбаевна, Медсестра приемного отделения,

ГКП на ПХВ “Коксуская  ЦРБ”

1. Определение:

При поступлении пациента в стационар первичное определение групповой и резус принадлежности по системам АВО и Резус D выполняется лечащим врачом методом применения жидких моноклональных реагентов — технически простым методом, но не приспособленным для сохранения результата.

Ввиду чего заключительное исследование, т.е.  подтверждение групповой и резус принадлежности проводится в централизованной лаборатории (иммунологии) методом гелевой технологии.

Заключительное исследование крови реципиентов проводится по следующим показателям:

• определение группы крови системы АВО двойной (перекрестной) реакцией (используются стандартные эритроциты О, А , В);
• определение антигена D системы Резус (при его отсутствии — реципиент считается резус-отрицательным);
• определение антиэритроцитарных аллоантител в непрямом антиглобулиновом тесте проводится перед каждой планируемой или предполагаемой трансфузией.

Заключение о групповой и резус принадлежности крови делается на основании первичного и повторного исследований, в случае совпадения результатов первичного и повторного определения. Если результаты не совпадают — проводят первичное и повторные исследования из вновь заготовленного образца крови реципиента. Любые расхождения должны быть выяснены и разрешены до переливания.

Подбор крови доноров для реципиентов с нерегулярными антителами проводится в организациях службы крови.

Скрининг нерегулярных антител перед экстренной гемотрансфузией не проводится, а должен быть проведен ретроспективно, после переливания на предтрансфузионном образце крови реципиента.

• Ресурсы:
• Кровь (эритроциты) реципиента;
• Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ, Д-супер;
• 0,9% раствор натрия хлорида;
• Планшеты;
• Пипетки, пробирки (вакутейнеры) ёмкостью не менее 10 мл (для центрифугирования или биологическая);
• Центрифуга;
• Песочные часы;
• Штатив для пробирок;
• Комнатный термометр;
• Шприцы;
• Гелиевые карточки;
• Стерильные ватные шарики;
• Раствор этилового спирта Спирт 70⁰;
• Средства индивидуальной защиты: колпак, маска, очки, стерильные перчатки;
• Дезинфицирующий раствор;
• Антисептическое мыло и кожный антисептик для обработки рук;
• КБСУ для медицинских отходов класса «Б».
• Документирование:
• Результат исследования групповой и резус принадлежности лечащего врача;
• Направление на анализ в централизованную лабораторию;
• Результат исследования групповой и резус принадлежности методом гелевой технологии (централизованной лаборатории)

• Основная часть процедуры:
  • Первичное определение группы крови по системе АВ0 проводится с Цоликлонами анти-А, анти-В и анти-АВ лечащим врачом:
• Перед проведением процедуры врач осматривает пробирку с кровью и проводит идентификацию образца крови согласно правилам Больницы;
• Обрабатывает руки согласно методическим рекомендациям по обработке рук сотрудников медицинских организаций РК,
• надевает средства индивидуальной защиты: перчатки, маску, колпак, очки;
• На планшет наносятся Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл.) под соответствующими надписями;
• Рядом с каплями антител наносятся по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл.);
•  Кровь с реагентом смешиваются отдельными палочками;
• За ходом реакции с Цоликлонами врач наблюдает визуально путем легкого покачивания в течение 3-х минут;
• Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 секунд, но наблюдение следует вести в течение полных 3-х минут ввиду позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А и В;
• Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным.
• Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья;
• При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются;
• При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешивается на плоскости 1 капля исследуемой крови (эритроцитов) с каплей 0,9% раствора натрия хлорида. Кровь можно отнести к АВ (IV) четвертой группе только при отсутствии агглютинации эритроцитов в 0,9% растворе натрия хлорида.

Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице (см. Приложение):

• Первичное определение резус принадлежности проводится лечащим врачом с Цоликлоном Д-супер:
• Наносят большую каплю (около 0,1мл.) реагента на пластинку;
• Наносят рядом маленькую каплю (0,02 – 0,03мл.) исследуемых эритроцитов. Тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой;
• Через 20-30 секунд мягко покачивают пластинку;
• Результаты реакции учитывают через 3 минуты после смешивания несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 секунд;
• При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии – резус отрицательная.
  • Определение группы крови системы АВО двойной (перекрестной) реакцией (используются стандартные эритроциты О, А1 и В) — подтверждение.
• Под предварительно нанесенными обозначениями  на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток 0αβ(I), Aβ(II) и Bα(III). Используются две различные серии каждой группы, всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по 3 капли в следующем порядке слева направо: 0αβ(I), Aβ(II) и Bα(III);
• На нижнюю часть пластинки также под соответствующими обозначениями наносят по одной маленькой (0,01 мл) капле стандартных эритроцитов в следующем порядке слева направо: 0(I), А (11) и B(III);
• Из пробирки, содержащей кровь пациента, пипеткой извлекают сыворотку (осторожно, чтобы не взболтать эритроциты) и накапывают ее по одной большой капле (0,1 мл) на подготовленные стандартные эритроциты. После этого той же пипеткой набирают со дна пробирки эритроциты испытуемой крови и наносят их по маленькой (0,01 мл) капле в 6 точек — по одной капле рядом с каждой каплей реагента;
• Во всех каплях сыворотку тщательно перемешивают с эритроцитами (сухой стеклянной палочкой), пластинку периодически покачивают;
• Наблюдение за ходом реакции проводят не менее 5 мин. Агглютинация в каплях обычно начинается быстро (10 — 30 с). Агглютинация в каплях, в которых сыворотка крови испытывается стандартными эритроцитами, может наступить поздно (к концу 5-й минуты) в связи с возможностью низкого титра содержащихся в испытуемой сыворотке агглютининов;
• По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в те капли, в которых она наступила, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при покачивании пластинки до истечения 5 мин.
• После завершения процедуры врач снимает и утилизирует СИЗ в КБСУ для медицинских отходов класса «Б»;
• Проводится обработка рук согласно методическим рекомендациям по обработке рук сотрудников медицинских организаций РК;
• Врач заполняет результат в специальный бланк.
•  Исследование групповой и резус принадлежности методом гелевой серологии групп – подтверждение (проводится в централизованной лаборатории Больницы).

Диапазон выполняемых тестов включает в себя определение фенотипа эритроцитов (включая слабые варианты антигенов), антиглобулиновый тест, скрининг и идентификацию антител, тесты на совместимость.

Метод основан на агглютинации эритроцитов в агаровом геле, предусматривает разделение эритроцитов при центрифугировании, при этом неагглютинированные эритроциты проходят через гель и оседают на дне пробирок (отрицательный результат), в то время как агглютинированные эритроциты задерживаются на поверхности или в толще геля (положительный результат).

Антиген D системы Резус у реципиентов определяется с помощью реагентов анти-D с соответствующими контролями для исключения ложноположительных результатов следующими методами:

• методом агглютинации на плоскости или гелевым методом с применением моноклональных реактивов, содержащих анти-D IgМ антитела (моноклон анти-D-супер);
• с использованием сыворотки анти-D или моноклонального реагента с анти-D IgG антителами в непрямом антиглобулиновом тесте.

После проведения повторного определения групповой и резус принадлежности ответственный сотрудник лаборатории документирует результат в специальном бланке или в соответствующем журнале проведения лабораторных исследований.

• Примечания:

Порядок взятия крови для иммуногематологического исследования должен соответствовать следующим положениям:

1. взятие венозной крови проводится ответственным медицинским работником;
2. если реципиент получает внутривенные вливания, образец крови для исследования берется из вены с противоположной стороны;
3. в некоторых случаях для иммуногематологического исследования допускается использование капиллярной крови, взятие крови производится лаборантом непосредственно перед исследованием;
4. Тесты проводят при температуре окружающей среды +15^оС +25^оС;
5. Хранение крови до тестирования допускается при температуре +2^оС +8^оС до 48 часов;
6. Не допускается на исследование образец крови с признаками видимого гемолиза;
7. Хранить реагенты при температуре +2^оС +8^оС, использовать до даты указанной на упаковке (кроме случаев, указания особых требований завода — изготовителя);
8. Направление на анализ должно содержать следующие сведения:
9. фамилия, имя, отчество реципиента, дата рождения, пол;
10. номер медицинской карты стационарного больного;
11. наименование отделения;
12. наименование теста;
13. клинические детали;
14. отметка о срочности выполнения исследования (если требуется);
15. фамилия, имя, отчество лица, выполнившего первичное исследование группы крови или направляющего кровь на другие виды исследование;
16. Маркировка пробирки с образцом должна содержать полное имя (фамилия, имя, отчество), дату рождения, местонахождение (отделение), дату взятия образца крови;
17. Подтверждение групповой и резус принадлежности крови пациента проводится в течение суток;
18. Бланк с результатом исследования вклеивается в медицинскую карту с обратной стороны титульного листа;
19. Не допускается переносить данные о групповой и резус принадлежности крови на титульный лист медицинской карты из других документов и источников, а также принимать подтверждение групповой и резус принадлежности, выполненное до госпитализации.
20. Сроки хранения образца крови:
21. образца крови реципиента для проведения иммуногематологических исследований при соблюдении условий хранения — не более 2 суток;
22. образца крови реципиента после проведения иммуногематологических исследований — не менее 2 суток;
23. хранение образцов крови реципиента и донора после постановки проб на индивидуальную совместимость — не менее 5 суток.
24. Образцы крови, имеющие признаки гемолиза или хилеза, не подлежат исследованию;
25. Запрещается встряхивать пробирки – резкое смешивание может вызвать пенообразование и гемолиз. Необходимо избегать попадания прямого солнечного света на пробу, т.к. это может повлиять на результаты проводимых анализов.